TẠO DÒNG, BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH PROTEIN TÁI TỔ HỢP ĐOẠN ĐẦU PROTEIN TOXA CỦA PASTEURELLA MULTOCIDA

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả:

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại:

Thông tin xuất bản: Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, 2019

Mô tả vật lý: tr.22

Bộ sưu tập: Báo, Tạp chí

ID: 312095

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Những nghiên cứu trước đây đã chứng minh toxA là gen độc tố chính của Pasteurella multocida. Vì vậy protein ToxA là một yếu tố tiềm năng cho các nghiên cứu chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành tạo dòng và biểu hiện đoạn gen 1,4kb của ToxA mã hóa trình tự axit amin từ 1 đến 487 (Tox1) trên vector biểu hiện pET32b trong Escherichia coli BL21 (DE3). Protein tái tổ hợp Tox1 được biểu hiện mạnh khi cảm ứng với IPTG 1mM và ethanol 3%. Sử dụng cột sắc ký ái lực Ni-NTA, chúng tôi đã tiến hành tinh sạch Tox1 sau khi hòa tan biến tính trong dung dịch đệm chứa urea 6M. Kết quả điện di SDS-PAGE và Western blot cho thấy, protein Tox1 đã được biểu hiện chính xác và tinh sạch, đạt tiêu chuẩn về độ tinh khiết. Đây sẽ là nguồn nguyên liệu ban đầu cho những nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi để chế tạo vacxin tái tổ hợp phòng bệnh tụ huyết trùng lợn do vi khuẩn Pasteurella multocida gây ra.ToxA has been documented to be the main toxin of Pasteurella multocida. Therefore, it is a potential factor for the studies to produce recombinant vaccines against Pasteurellosis in pigs. In this study, we cloned and expressed Tox1 protein, a N-fragment of ToxA (from amino acid 1 to amino acid 487), in Escherichia coli BL21 with pET32b vector. The recombinant Tox1 protein was expressed well when induced with 1mM IPTG and 3% ethanol. The protein was denaturated and dissolved in lysis buffer containing 6M urea and purified via Ni-NTA column. The SDS-PAGE and Western blot results showed that Tox1 was correctly expressed and well-purified. This is the preliminary material for our further studies to produce recombinant vaccine against Pasteurellosis in pigs caused by Pasteurella multocida

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR