A determination method of ethylene glycol in animal feed by liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) was developed. The analysis was performed with a C18 column (150 mm × 4.6 mm, 3.5 µm), and a gradient mobile phase of 0.1 % formic acid solution and acetonitrile. Ethylene glycol and surrogate standard (propylene glycol) were extracted by water at room temperature, derivatized with benzoyl chloride in alkaline medium, and analyzed by LC-ESI-MS/MS. The method has high specificity and selectivity with a detection limit of 0.1 mg/kg, linearity range of 1 - 20 µg/mL, repeatability of 3.08 - 4.41 %, and recovery of 91.1 - 102.0 %, which meet AOAC requirements. This method has been applied to analyze some marketed animal feed samples.Phương pháp xác định ethylene glycol trong thức ăn chăn nuôi bằng sắc ký lỏng kết hợp với ion hóa phun điện tử ghép nối khối phổ hai lần (LC-ESI-MS/MS) đã được xây dựng và thẩm định. Phương pháp này được thực hiện với cột C18 (150 mm × 4,6 mm, 3,5 µm), pha động gradient bao gồm acid formic 0,1 % và acetonitrile. Ethylene glycol và chất chuẩn đồng hành (propylene glycol) được chiết xuất bằng nước ở nhiệt độ phòng, tạo dẫn xuất bằng benzoyl chloride trong môi trường kiềm và được phân tích bằng LC-ESI-MS/MS. Kết quả thẩm định cho thấy phương pháp này có độ đặc hiệu và độ chọn lọc cao với giới hạn phát hiện 0,1 mg/kg, khoảng tuyến tính 1 - 20 µg/mL, độ lặp lại 3,08 - 4,41 %, và độ thu hồi 91,1 - 102,0 %, đáp ứng các yêu cầu của AOAC. Phương pháp đã được áp dụng để phân tích một số thức ăn chăn nuôi phân phối trên thị trường.