Kombucha beverage is a traditional and popular natural fermented beverage consumed across the globe. Kombucha beverage is produced by fermenting sweetened black tea, sucrose with consortium of acetic acid bacteria and yeasts. It is important to understand the microbial composition in Kombucha to facilitate better control of the fermentation process. Therefore, this study characterized the dominant acetic acid bacteria in Kombucha sample. Acetic acid bacteria isolated from the Kombucha using glucose-ethanol medium. Based on morphological, biochemical characterization, and 16S rRNA gene, 14 isolated strains belong to 2 species and were identified as Komagataeibacter saccharivorans and Komagataeibacter rhaeticus. These strains showed good biofilm forming abilities. Furthermore, the antimicrobial activity against five pathogenic bacteria including Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Samonella enterica ATCC 13076, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Bacillus cereus ATCC 14579 of isolated acetic acid bacteria strains was also determined.Trà Kombucha là một loại đồ uống lên men tự nhiên được tiêu thụ trên toàn cầu. Kombucha được sản xuất bằng cách lên men trà, đường sucrose cùng với tổ hợp vi sinh vật gồm nấm men và vi khuẩn acetic. Hiểu biết về thành phần vi sinh vật trong Kombucha sẽ góp phần kiểm soát tốt hơn quá trình lên men. Do vậy, nghiên cứu này tập trung phân tích đặc điểm của vi khuẩn acetic chiếm ưu thế trong trà Kombucha. Các chủng vi khuẩn acetic được phân lập trên môi trường glucose-ethanol và được phân loại dựa trên các đặc điểm hình thái, sinh hóa và phân tích trình tự gen 16S rARN. Kết quả cho thấy có 14/20 chủng phân lập thuộc nhóm vi khuẩn acetic. Các loài vi khuẩn acetic ưu thế được xác định là Komagataeibacter saccharivorans chiếm 92,9% và Komagataeibacter rhaeticus chiếm 7,1%. Các chủng này đều có khả năng tạo biofilm, trong đó các chủng KCB05, KCB07, KCB24, KCB28 có khả năng tạo màng tốt nhất. Hoạt tính kháng 5 chủng vi khuẩn gây bệnh bao gồm Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Samonella enterica ATCC 13076, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Bacillus cereus ATCC 14579 của các chủng vi khuẩn acetic phân lập cũng được xác định Trong đó, số lượng chủng vi khuẩn acetic có hoạt tính kháng Escherichia coli ATCC 25922 đạt 27,8%, Staphylococcus aureus ATCC 25923 là 22,2%, Samonella enterica ATCC 13076 là 33% và cao nhất là Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 đạt 50%.