THIẾT KẾ VÀ TỐI ƯU HÓA PHẢN ỨNG MULTIPLEX PCR ĐỂ PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH DANH KIỂU GEN VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI Ở VIỆT NAM

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Thùy Linh Bùi, Ngọc Minh Nghiêm, Thị Bích Thủy Võ, Minh Thương Vũ

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại:

Thông tin xuất bản: Tạp chí Khoa học và Công nghệ - Đại học Thái Nguyên, 2023

Mô tả vật lý: tr.45726

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 339892

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Multiplex PCR is a widely used molecular biology method in many studies because of its superiority. A reaction that amplifies multiple DNA sequences in a single PCR reaction. Therefore, we have studied and applied the molecular biotechnology technique of Multiplex PCR to detect the presence of the ASF virus and identify which genotype is circulating in Vietnam. The objective is to design and optimize the multiplex PCR reaction as the basic kit for detecting and genotyping the ASF virus in Vietnam. The results showed that the multiplex PCR reaction was successfully designed and optimized, including the concentration of primers Buffer 1X
dNTP 0.5 µM
1.25 mM MgCl2
0.05 U/µl Taq DNA polymerase, primers 0.1 – 0.4 µM (p72-F, p72-R, p72-SNP, p72-g01, p72-g02, p72-g08, p72-g09, p72-g10, p72-g23)
≥ 150 pmol/µl DNA standard. Heat cycle is 95oC - 5 minutes
(95oC – 30 sec
62oC – 15 sec
72oC – 30 sec) x 30 cycles
72oC - 7 minutes. This result can be used to develop a kit to detect and identify the ASF virus, which is meant for use in the Vietnamese livestock industry.Multiplex PCR là phương pháp sinh học phân tử nhằm khuếch đại nhiều trình tự DNA chỉ trong một phản ứng và được ứng dụng phổ biến trong nhiều nghiên cứu vì tính ưu việt của nó. Vì vậy, chúng tôi đã nghiên cứu và ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR để phát hiện sự có mặt của virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi, đồng thời định danh genotype đang lưu hành tại Việt Nam. Mục tiêu là thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR làm cơ sở cho việc chế tạo một bộ kit phát hiện và định danh kiểu gen virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi ở Việt Nam. Kết quả đã thiết kế và tối ưu hóa thành công phản ứng multiplex PCR gồm: nồng độ Buffer 1X
dNTP 0,5 µM
1,25 mM MgCl2
0,05 U/µl Taq DNA polymeraza, nồng độ các mồi là 0,1 – 0,4µM (p72-F, p72-R, p72-SNP, p72-g01, p72-g02, p72-g08, p72-g09, p72-g10, p72-g23)
≥ 150 pmol/µl DNA chuẩn. Chu trình nhiệt là 95oC - 5 phút
(95oC - 30 giây
62oC - 15 giây
72oC - 30 giây) x 30 chu kỳ
72oC - 7 phút. Kết quả này sẽ được sử dụng để phát triển bộ kít phát hiện và định danh virus gây bệnh dịch tả lợn châu Phi với ý nghĩa sử dụng trong ngành chăn nuôi Việt Nam.

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR