Bixin and norbixin are two types of apocarotenoids that can be extracted from the seeds of cashew nuts (Bixa orellana). They are the main components of annatto, a natural food coloring agent, which is widely used in the food industry to impart yellow and orange-red hues to various food products. The objective of this study was to develop a method for the simultaneous determination of bixin and norbixin in different food samples using high performance liquid chromatography (HPLC-PDA). The samples were extracted with ethanol by ultrasonic vibration at room temperature for 20 minutes. The extracted samples were then analyzed by HPLC-PDA using XBridge C18 chromatography column (150 mm x 4.6 mm
5 µm), and isocratic elution with a mobile phase consisting of 0.5 % formic acid in water: MeOH (15:85, v:v) at 450 nm detection wavelength. The method showed good specificity, high correlation coefficients (R2 >
0.9999) for the calibration curves, acceptable repeatability (1.9-4.2% for bixin and 4.1-5.9% for norbixin), satisfactory recovery (96.0-107% for bixin and 95.0-109% for norbixin), low limits of detection (LOD) (0.17-0.5 mg/kg for both bixin and norbixin), and low limits of quantification (LOQ) (0.56-1.31 mg/kg for both bixin and norbixin). The method was successfully applied to the simultaneous determination of bixin and norbixin in 35 food samples. The results showed: concentrations ranging from 736 mg/100g to 5911 mg/100g (bixin) and from 8.91 mg/100g to 51.9 mg/100g (norbixin) for raw material samples and from 5.85 mg/kg to 490 mg/kg (bixin) and 0.83 ng/kg to 8.02 mg/kg (norbixin) for food samples.Bixin và norbixin là hai hợp chất apocarotenoid được tìm thấy trong hạt của cây điều (Bixa orellana), được chiết xuất để tạo thành màu annatto – một loại phẩm màu tự nhiên, được sử dụng phổ biến trong công nghiệp thực phẩm tạo màu vàng và màu đỏ cam. Nghiên cứu này nhằm xây dựng phương pháp xác định đồng thời bixin và norbixin trong một số thực phẩm bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC-PDA). Mẫu được chiết siêu âm với dung môi ethanol ở nhiệt độ phòng trong thời gian 20 phút. Dịch chiết mẫu được phân tích trên hệ thống HPLC với điều kiện như sau: detector PDA được cài đặt tại bước sóng 450 nm, cột sắc ký XBridge C18 (150 mm x 4,6 mm
5 µm), pha động chứa acid formic 0,5%: MeOH (15:85, v: v) theo chế độ đẳng dòng. Phương pháp có độ đặc hiệu tốt, đường chuẩn có hệ số xác định R2 ≥ 0,9999. Độ lặp lại trong khoảng 0,96 - 4,2% đối với bixin và 4,1 - 5,9% đối với norbixin
độ thu hồi của phương pháp với bixin và norbixin tương ứng là 96,0 - 107% và 95,0 - 109%, giới hạn phát hiện (LOD) của bixin và norbixin là 0,17 - 0,5 mg/kg và giới hạn định lượng (LOQ) là 0,56-1,31 mg/kg. Phương pháp đã được áp dụng để phân tích bixin và norbixin trong 35 mẫu khác nhau với hàm lượng tương ứng trong các mẫu nguyên liệu là 736 - 5911 mg/100g (bixin) và 8,91 - 51,9 mg/100g (norbixin) và trong thực phẩm là 5,85 - 490 mg/kg (bixin) và 0,83 - 8,02 mg/kg (norbixin).