Thiết kế phản ứng TTSS1-real-time loopmediated isothermal amplification xác định nhanh vi khuẩn Burkholderia pseudomallei gây bệnh melioidosis

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Thị Thu Hằng Đinh, Anh Sơn Hồ, Văn Tổng Hoàng, Xuân Sử Hoàng, Thu Hồng Lê, Thái Sơn Nguyễn

Ngôn ngữ: Vie

Ký hiệu phân loại: 616.9 Other diseases

Thông tin xuất bản: Nội khoa Việt Nam 2021

Mô tả vật lý: 45520

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 410401

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Thiết kế phản ứng TTSS1-real-time LAMP xác định vi khuẩn B. pseudomallei gây bệnh melioidosis. Vật liệu và phương pháp: Ba bộ mồi LAMP đã được tham khảo, thiết kế và thử nghiệm trong phản ứng real-time LAMP, nhắm vào vùng gen đích orf11-TTSS1. Bộ mồi hoạt động hiệu quả nhất được lựa chọn để tối ưu phản ứng real-time LAMP với nồng độ mồi tiêu chuẩn 1,6
0,2
0,4 µM (FIP/BIP, B3/F3, LF/LB) pha loãng theo các mức là 0,2
0,4
0,6
0,8 và 1X sử dụng WarmStart LAMP Master Mix (New England BioLabs, Mỹ). Phản ứng realtime LAMP với bộ mồi tối ưu được khảo sát giới hạn phát hiện ở dải nồng độ DNA pha loãng 103 - 102 -101 -4-2-1 copy/µl, đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu trên các mẫu đối chứng là B. pseudomallei, P. aeruginosa và B. cepacia, có so sánh với PCR. Kết quả và kết luận: Phản ứng real-time LAMP với bộ mồi 2 tối ưu phát hiện chính xác vi khuẩn B. pseudomallei khi đánh giá trên các chủng đối chứng, đạt ngưỡng phát hiện 4 copy/μl, thời gian chẩn đoán trong 30 phút trên hai hệ thống là RotorGene Q (Qiagen, Đức) và Genie III (OptiGene, Anh) với điều kiện ủ ổn nhiệt 65o C, hiệu quả vượt trội so với phản ứng PCR xác định B. pseudomallei. Phản ứng này có tiềm năng phát triển thành kit phát hiện nhanh tại hiện trường và là công cụ hữu ích góp phần dự phòng, điều trị bệnh melioidosis do tác nhân sinh học B. pseudomallei.

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR