Từ mẫu bùn thải của ao nuôi tôm tại huyện Phong Điền, tỉnh Thừa Thiên Huế, chúng tôi đã phân lập được chủng vi khuẩn phân giải casein. Định danh phân tử thông qua giải trình tự 16S rRNA và so sánh với cơ sở dữ liệu GenBank cho thấy chủng phân lập tương đồng cao với vi khuẩn Bacillus tequilensis và được đặt tên là B. tequilensis ON1. Hoạt tính protease ngoại bào đạt giá trị cao nhất 192,42 U·mL-1 sau 24 giờ nuôi cấy. Điện di SDS-PAGE trên nền cơ chất cho thấy protease ngoại bào chính của chủng ON1 có khối lượng phân tử khoảng 130 kDa. Enzyme ngoại bào hoạt động tối ưu ở 50 °C và pH 8. Hoạt tính protease tăng lên khi có mặt Ca2+ và Mg2+, trong khi đó Mn2+ ức chế hoạt động của protease. Protease hoạt động và ổn định hơn trong các dung môi hữu cơ kỵ nước., Tóm tắt tiếng anh, A bacterial strain with casein hydrolytic activity was isolated from shrimp waste sludge from a culture pond at Phong Dien, Thua Thien Hue. Molecular identification using 16S rRNA nucleotide sequence shows a high similarity to Bacillus tequilensis on the NCBI database. Hence, the isolate was named B. tequilensis ON1. Extracellular protease activity value is 192,42 U·mL-1 after 24 h culture. Zymogram SDS-PAGE electrophoresis shows that the major extracellular protease has a molecular weight of 130 kDa. The enzyme exhibits maximal activity at 50 °C and pH 8. Protease activity increases in the presence of Ca2+ and Mg2+ ions, while Mn2+ inhibits protease activity. The protease activity was more active and stable in hydrophobic organic solvents.