Tinh sạch interleukin-3 của người tái tổ hợp được biểu thị dưới dạng các thể bao gồm trong Escherichia coli

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Trong Khoa Dao, Thu Huong Duong, Thi Thu Hong Le, Thi Quy Nguyen, Nam Hai Truong

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại: 576 Genetics and evolution

Thông tin xuất bản: Tạp chí Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, 2021

Mô tả vật lý: 91-98

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 437807

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Trình bày phương pháp đơn giản để hòa tan, tái tạo và tinh chế IL-3 tái tổ hợp của người được biểu hiện trong tế bào E. coli. Đầu tiên, IL-3 được biểu hiện ở E. coli JM109 (DE3) sau khi được cảm ứng với 0,05 mM IPTG ở 25 oC. Trong các điều kiện này, IL-3 được tạo ra như các thể bao gồm trọng lượng phân tử xấp xỉ 15 kDa trên gel SDS-PAGE (14%). Tiếp theo, IL-3 dạng viên được tách khỏi các protein hòa tan của vật chủ bằng cách sử dụng sóng siêu âm sau quá trình ly tâm. Sau đó, hai chất biến tính mạnh như urê hoặc guanidine hydrochloride được sử dụng để kiểm tra khả năng hòa tan IL-3 không hòa tan. Sau đó, IL-3 hòa tan thu được được biến tính lại và chịu sắc ký lọc gel để thu protein IL-3 tinh khiết. Kết quả của chúng tôi cho thấy các phân đoạn chứa một dải IL-3 đơn lẻ với tỷ lệ thu hồi khoảng 30%. Một số đặc điểm của IL-3 tái tổ hợp sau đó đã được phân tích. Cytokine IL-3 cho thấy độ tinh khiết cao của nó với đỉnh sắc nét trên biểu đồ sắc ký RP-HPLC. Western blot cho thấy một dải tín hiệu rõ ràng trên màng PVDF để chứng minh tính kháng sinh phù hợp của nó đối với kháng thể IL-3 của người. Bên cạnh đó, trình tự axit amin của cytokine này đã được xác nhận bằng phương pháp đo khối phổ. Cytokine IL-3 tinh khiết là nguyên liệu tiềm năng cho các thử nghiệm tiếp theo.

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR