Tiêu chảy là bệnh phổ biến dẫn đến tình trạng mất nước, suy dinh dưỡng ở trẻ em, nặng nhất có thể gây tử vong. Bên cạnh các trường hợp tiêu chảy xác định được nguyên nhân, một tỷ lệ đáng kể các trường hợp tiêu chảy không rõ nguyên nhân. Trong nghiên cứu này, phương pháp PCR-RFLP gen 16S rRNA được thiết lập để đánh giá tính đa dạng của vi khuẩn trong phân của trẻ tiêu chảy không rõ nguyên nhân và hỗ trợ thêm cho việc xác định nguyên nhân. Đầu tiên, trong số bảy enzyme giới hạn được nghiên cứu, MboI đã cắt metagene 16S của chín chủng chỉ thị và vi khuẩn từ phân tạo ra đa hình chiều dài đoạn giới hạn đa dạng nhất. Các đoạn DNA được tạo ra từ sự phân cắt bằng RsaI có giá trị bổ sung thông tin cho một số đoạn DNA nhất định. Chương trình tough-up PCR đã khuếch đại metagene 16S rRNA đa dạng nhất so với cácchương trình PCR thông thường và chương trình tough-down, do đó đã tạo nguồn gen tốt nhất cho phân tích RFLP. Qua quan sát điện di đồ PCRRFLP, một số băng DNA khác biệt có nguồn gốc từ phân trẻ bị bệnh có kích thước tương ứng tại vị trí các băng chỉ thị của E. coli hoặc Salmonella. Các đoạn DNA này cần được giải trình tự để khẳng định sự có mặt của vi khuẩn này trong mẫu bệnh phẩm.