Xây dựng quy trình phát hiện nấm Candida spp. bằng phương pháp multiplex PCR

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Thị Thanh Thảo Lê, Hiếu Nguyễn, Minh Thái Nguyễn, Thị Ngọc Yến Nguyễn, Tú Anh Nguyễn, Cảnh Trình Phan, Hoàng Diệu Tôn, Quốc Việt Trần

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại:

Thông tin xuất bản: Tạp chí Y học Việt Nam (Tổng hội Y học Việt Nam), 2023

Mô tả vật lý: 226-231

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 448243

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Tóm tắt
Chủ đề

Nghiên cứu này thực hiện với 2 mục tiêu: (1) Xác định và tối ưu hóa điều kiện multiplex PCR phát hiện 04 nấm C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis và C. parapsilosis. (2) Xây dựng quy trình phát hiện đồng thời 04 loài nấm C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis và C. parapsilosis bằng phương pháp multiplex PCR. Phương pháp: Các mẫu Candida spp. được thu nhận tại Bệnh viện Đại học Y Dược TP. HCM, Bệnh viện Lê Văn Thịnh và Bệnh viện Quân Y 175 từ tháng 10/2020 đến tháng 5/2021. Vi nấm được phát hiện bằng các phương pháp: (1) thử nghiệm tạo ống mầm, (2) phân lập trên môi trường CHROMagar Candida, (3) tối ưu hóa quytrình phát hiện Candida spp. bằng kỹ thuật Multiplex PCR và sử dụng quy trình tối ưu trong phát hiện Candida spp. từ mẫu bệnh phẩm và (4) giải trình tự 5 sản phẩm khuếch đại để kiểm tra tính đặc hiệu. Sau đó, tiến hành so sánh và biện luận kết quả phát hiện Candida spp. bằng 3 phương pháp: thử nghiệm tạo ống mầm, CHROMagar Candida và Multiplex PCR. Kết quả: 40 mẫu bệnh phẩm được phát hiện bằng vào 3 phương pháp: thử nghiệm tạo ống mầm: phát hiện 13 loài C. albicans và 27 loài non-albicans Candida, nuôi cấy môi trường CHROMagar Candida: phát hiện 18 loài C. albicans, 5 loài C. tropicalis, 3 loài C. glabrata và 14 loài non-albicans Candida. Với multiplex PCR: phát hiện 18 loài C. albicans, 7 loài C. tropicalis, 8 loài C. glabrata, 6 loài C. parapsilosis và 1 loài không xác định được. Các thành phần Multiplex PCR phát hiện 4 loài Candida được tối ưu trong 1 ống eppendorf: dung dịch đệm PCR 10 X 2,2 μl
MgSO4 25 mM 0,6 μl
Taq DNA polymerase 5 UI/μl 0,3 μl
dNTP 10 mM 0,5 μl, mồi Falb 5 pmol 0,3 μl
Ralb 5 pmol 0,5 μl
Ftro 5 pmol 0,3 μl
Fpara 5 pmol 0,6 μl
Rpara 5 pmol 0,6 μl
Fgla 5 pmol 0,3 μl
Rgla 5 pmol 0,3 μl
dịch chiết DNA 1 μl
nước khử khoáng vừa đủ 25 μl. Chương trình PCR được tối ưu: giai đoạn biến tính ban đầu 95 oC 5 phút (1 chu kỳ), giai đoạn 2 (40 chu kỳ): biến tính 95 oC 30 giây, gắn mồi 59 oC 30 giây, kéo dài mồi 72 oC 30 giây
giai đoạn kéo dài cuối cùng 72 oC 8 phút (1 chu kỳ).

Tạo bộ sưu tập với mã QR