Sự biểu hiện của gen mã hóa endoglucanase GH5-4 có nguồn gốc từ dữ liệu DNA hệ gen của vi khuẩn trong dạ cỏ dê ở Escherichia coli

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Trong Khoa Dao, Thi Huyen Do, Thi Thuy Hoa Ha, Quynh Giang Le, Hai Dang Nguyen, Thi Kien Nguyen, Nam Hai Truong

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại: 576 Genetics and evolution

Thông tin xuất bản: Tạp chí Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, 2021

Mô tả vật lý: 17-26

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 450498

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Tóm tắt
Chủ đề

Các thành phần Glycoside Hydrolase 5 (GH5) bao gồm một loạt các hoạt động của enzym trên oligosaccharid, polysaccharid và glycoconjugates từ nhiều loài khác nhau. Phân họ 4 (GH5-4) được làm giàu trong một số endo-β-1,4-endoglucanase có tính đặc hiệu rộng (EG). Từ dữ liệu DNA hệ gen của vi khuẩn trong dạ cỏ dê Việt Nam, một gen GL0361920 mã hóa endoglucanase GH5-4 đã được khai thác và chọn lọc để biểu hiện ở Escherichia coli. Đầu tiên, các codon của gen được tối ưu hóa và gen tối ưu hóa codon (ví dụ 3) được tổng hợp nhân tạo và chèn vào pET21a (+) ở vị trí NdeI-XhoI để biểu hiện ở E. coli. Kết quả biểu hiện gen ở 5 chủng E. coli được phân tích bởi SDS-PAGE cho thấy endoglucanase tái tổ hợp (EG3) được mã hóa bởi eg3 biểu hiện tốt nhất ở chủng BL21, Origami, không được biểu hiện ở chủng JM109 và được biểu hiện với số lượng rất ít. ở chủng C43 và Rosetta. Trong số các môi trường LB, TB, LB, SB, TBD, chủng BL21 tái tổ hợp phát triển tốt nhất ở môi trường TB và tạo ra tổng lượng EG3 cao hơn các môi trường khác. IPTG cảm ứng có tác động tiêu cực đến sự phát triển của tế bào nhưng việc tăng nồng độ IPTG từ 0,05 mM lên 0,9 mM không làm tăng tác động tiêu cực lên khối lượng tế bào và sản xuất EG3 gần như giống nhau ở các nồng độ IPTG khác nhau. Ở 25 oC, trong môi trường TB chứa 0,1 mM IPTG, chủng vi khuẩn E. coli BL21 tái tổ hợp chứa pET21-eg3 tạo ra khoảng một nửa endoglucanase EG3 ở dạng hòa tan thể hiện hoạt tính thủy phân cơ chất CMC. Ở OD600 = 10, EG3 hòa tan được tích lũy trong chủng vi khuẩn E. coli BL21 tái tổ hợp có hoạt tính là 0,22 ± 0,006 U / ml.

Tạo bộ sưu tập với mã QR