Nhân dòng và biểu hiện 3 chymotrypsin-like protease của SARS-CoV-2 bằng vector pET28a ở E. coli

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Thị Xuân Giang Trần, Thu Trang Ngô, Nho Thái Đinh, Tuấn Nghĩa Phan, Thị Hồng Loan Nguyễn, Thị Duy Ly Vũ

Ngôn ngữ: Vie

Ký hiệu phân loại: 576 Genetics and evolution

Thông tin xuất bản: VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, 2023

Mô tả vật lý: 39-48

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 467228

Thêm vào giỏ Liên kết toàn văn

Tóm tắt
Chủ đề

3 chymotrypsin-like protease (3CLpro) của virus Corona gây hội chứng hô hấp cấp tính type 2 (SARS-CoV-2) cần thiết cho quá trình nhân lên và đóng gói của virus và được xem như một trong các đích quan trọng để ức chế hoạt động của virus. Trong nghiên cứu này, gen mã hóa cho 3CLpro (918 bp) của SARS-CoV-2 đã được nhân bản thành công từ cDNA của virus bằng PCR và được nhân dòng vào vector pGEM-T. Đoạn gen mã hóa cho 3CLpro sau đó được đưa vào vector biểu hiện pET28a ngay sau trình tự nucleotide của 6 gốc histidine để tạo ra dạng protein dung hợp 6xHis-3CLpro. Cấu trúc gen này đã được biểu hiện thành công trong tế bào E. coli. Các điều kiện thích hợp để biểu hiện 3CLpro bao gồm nhiệt độ nuôi cấy vi khuẩn E. coli tái tổ hợp ở 20 oC, cảm ứng bằng isopropyl thiogalactopyranoside (IPTG) 1,0 mM tại pha logarit khi mật độ tế bào (OD600) khoảng 0,7-0,8 và sinh khối được thu sau 24 giờ cảm ứng. 3CLpro tái tổ hợp đã được tinh sạch bằng cột sắc ký ái lực Ni-sepharose trong điều kiện biến tính, có kích thước khoảng 41 kDa trên điện di gel polyacrylamide có chứa sodium dodesyl suphate natri (SDS-PAGE), phản ứng đặc hiệu với kháng thể đa dòng kháng 3CLpro. 3CLpro tinh sạch sau khi hồi tính có hoạt tính phân cắt cơ chất đặc hiệu của 3CLpro.

1.

Tạo bộ sưu tập với mã QR