Currently, meat products on the market are not strictly monitored. Several products are adulterated or mixed with cheaper ingredients to increase illegal profits. This problem is hardly solved due to the unprecise authentication when using traditonal methods. In the present study, multiplex PCR assay was developed and applied to distinguish between pork and beef and processed products. The method based on the gene detection of COI for pork and ND5 for beef. After optimization, the suitable parameters for muliplex PCR reactions are follows: DNA concentration at 50 ng/µL, primer concentration at 10 µM and annealing temperature at 57 ºC. Specific PCR amplifications for pork and beef are 294 bp and 106 bp, repectively. The established multiplex PCR were also applied successfully to confirm the adulteration of meat products on markets.Keywords: Beef, pork, multiplex PCR, meat authentication, mixed meat.Hiện tượng pha trộn các thành phần trong thực phẩm đang là vấn đề được người tiêu dùng quan tâm. Hiện nay, việc xác định sự lẫn tạp này bằng các phương pháp truyền thống như cảm quan và sinh hóa không thật sự đạt hiệu quả cao. Trong nghiên cứu này, kỹ thuật multiplex PCR được hoàn thiện để phân biệt thịt heo và thịt bò tươi từ đó áp dụng vào việc xác định sự hiện diện của hai loại thịt này trong thực phẩm. Phương pháp được tiến hành dựa trên sự phát hiện đặc hiệu của hai đoạn gene ty thể COI ở thịt heo và ND5 ở thịt bò. Kết quả xác định được chu trình phản ứng multiplex PCR tối ưu với các thông số của phản ứng như sau: nồng độ DNA là 50 ng/µL, nồng độ primer heo, bò lần lượt là 10 µM và 10 µM, nhiệt độ bắt cặp ở 57 ºC. Sản phẩm PCR chuyên biệt có kích thước khuếch đại ở 294 bp đối với thịt heo và 106 bp đối với thịt bò. Sau đó, quy trình này đã được ứng dụng thành công ngoài thực tiễn để phát hiện chính xác thịt heo và thịt bò có trong các sản phẩm chế biến từ thịt.Từ khóa: Thịt heo, thịt bò, multiplex PCR, phân biệt thịt, pha trộn thịt