Nhân dòng và biểu hiện enzyme Maltooligosyltrehalose trehalohydrolase từ chủng vi khuẩn cổ sulfolobus solfataricus DSM 1616 trong Bacillus subtilis WB800

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Thị Thanh Huyền Đỗ, Thị Tuyên Đỗ, Thị Yến Hoàng, Đức Mạnh Lê, Thanh Hoàng Lê, Mạnh Đạt Nguyễn, Sỹ Lê Thanh Nguyễn, Thị Ánh Tuyết Nguyễn, Thị Hiền Trang Nguyễn, Thị Thảo Nguyễn, Thị Thu Nguyễn, Thị Trung Nguyễn, Tiến Cường Nguyễn

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại: 589.95 [Unassigned]

Thông tin xuất bản: Tạp chí Công nghệ Sinh học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, 2020

Mô tả vật lý: 363-372

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 493765

Thêm vào giỏ

Maltooligosyltrehalose trehalohydrolase (MTHase) là một enzyme công nghiệp dùng cho việc sản xuất đường trehalose. Nghiên cứu biểu hiện enzyme MTHase trong B. subtilis WB800 là một hệ biểu hiện protein ngoại bào có năng suất biểu hiện cao và ổn định. Hiện nay một số chủng B. subtilis như B. subtilis WB600, WB700, WB800 đã loại bỏ tương ứng 6, 7 và 8 protease ngoại bào, do đó hạn chế việc phân cắt protein ngoại lai, dẫn tới làm tăng năng suất protein biểu hiện. Vì vậy, MTHase sẽ được nghiên cứu biểu hiện trong B. subtilis WB800 để nâng cao năng suất biểu hiện sinh tổng hợp enzyme. Gene mã hóa cho MTHase được chèn vào genome của B. subtilis WB800 bằng sự kiện trao đổi chéo với đoạn tương đồng trên vector biểu hiện pAC7. Đoạn DNA mã hóa cho MTHase được nhân lên từ S. solfataricus DSM 1616, đồng thời đoạn signal biểu hiện acoA-amyE được nhân từ vectơ pMSE3. Hai sản phẩm từ hai quá trình nhân dòng riêng biệt được nối lại với nhau bằng phản ứng PCR dung hợp để tạo cassette acoMTH. Thông qua sự kiện trao đổi chéo ở hai đầu 3'amyE- 5'amyE, cassette biểu hiện được chèn vào genome của B. subtilis WB800. Từ những số liệu thu được cho thấy cassette biểu hiện được chèn thành công vào genome B. subtilis WB800 và thay thế đoạn 3'amyE-5'amyE, làm mất khả năng sản xuất amylase của vật chủ. MTHase được biểu hiện sau khi được cảm ứng 0,5% acetoin sau 48 giờ, có kích thước khoảng 64 kDa, mức độ protein biểu hiện ở các dòng tăng tương ứng đạt 2,5%, 15,2% và 21,95% sau khi được đánh giá bằng phần mềm dolphin 1D so với chủng gốc B. subtilis WB800.

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR