Tối ưu mã di truyền để biểu hiện protein ORF2 của Porcine circovirus trong Escherichia Coli=Codon optimization for expression of porcine circovirus ORF2 protein in Escherichia coli

0 Người đánh giá. Xếp hạng trung bình 0

Tác giả: Vũ Hoàng Đặng, Hữu Thanh Khuất, Thị Thanh Hà Trần

Ngôn ngữ: vie

Ký hiệu phân loại:

Thông tin xuất bản: Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, 2017

Mô tả vật lý:

Bộ sưu tập: Metadata

ID: 49923

Thêm vào giỏ

Bài báo này trình bày một số kết quả về tối ưu hóa mã di truyền gen ORF2 của porcine circovirus và biểu hiện ORF2 trong vi khuẩn chủ Escherichia coli BL21(DE3). Gen ORF2 tối ưu đã được tách dòng thành công trong vector biểu hiện pET22b(+) và chuyển vào E. coli BL21(DE3). Sự biểu hiện của protein ORF2 trong E. coli BL21(DE3) đã được kiểm tra bằng điện di gel polyacrylamide và lai Western blot. Kết quả nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện biểu hiện của chủng tái tổ hợp cho thấy protein ORF2 tái tổ hợp được biểu hiện mạnh ở ở nồng độ chất cảm ứng IPTG 0,05 mM, nhiệt độ 37oC và thời gian cảm ứng là 4 giờ. Protein ORF2 tái tổ hợp đã được tinh sạch sử dụng sắc ký ái lực đặc hiệu đuôi His-tag. Protein ORF2 tái tổ hợp dạng tinh sạch này có thể được sử dụng làm kháng nguyên gây miễn dịch trên động vật tạo kháng thể đặc hiệu. Việc biểu hiện thành công protein kháng nguyên ORF2 của porcine circovirus trong E. coli BL21(DE3) sẽ giúp cung cấp nguồn kháng nguyên phục vụ cho các nghiên cứu ứng dụng trong tạo sinh phẩm chẩn đoán và phát triển vaccine thế hệ mới.In this paper, some results of codon optimization of porcine circovirus ORF2 gene and expression of ORF2 protein in Escherichia coli were presented. Optimal ORF2 gene was successfully cloned in expression vector pET22b (+) and transformed into E. coli BL21(DE3) host. Expression of ORF2 protein in E. coli BL21(DE3) was checked by polyacrylamide gel electrophoresis and Western blot method. Optimization studies of expression conditions for recombinant strain indicated that the highest level of recombinant ORF2 was achieved in conditions of 0.05% isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) inducer, 37oC temperature after 4 hours induction. Recombinant ORF2 protein was purified using His-tag specific affinity chromatography and could be used as antigen for animal immunization to generate specific antibodies. Successful expression of porcine circovirus ORF2 protein in E. coli BL21(DE3) could provide antigen source for applied studies in diagnosis and development of novel vaccines.

1. Đọc trực tuyến

1. Đọc trực tuyến

Tạo bộ sưu tập với mã QR